Pemurnian Antibodi Monoklonal terhadap Virus Hepatitis B yang diisolasi dari Asites Mencit Balb/c Menggunakan “Homemade” Protein A Spin Mini Kolom
Authors
-
Sulaiman Ngongu Depamede
Faculty of Animal Science and Immunobiology Laboratory, Mataram University
Keywords:
Analisis biaya, Renograf diagnostic, diseminasi produkAbstract
Penelitian ini bertujuan mengembangkan pemurnian antibodi monoklonal menggunakan eksmini kolom yang isinya diganti dengan partikel gelassilika yang terkonjugasi dengan Protein A. Matriks Protein A yang digunakan adalah Prosep vA, sedangkan antibodi target adalah antibodi monoklonal (MAb) terhadap antigen permukaan virus hepatitis B yang diisolasi dari asites mencit Balb/c. Sebelum pemurnian, sampel asites dibagi menjadi 3 yang masingmasing diinkubasikan dengan Protein A dalam 3 perlakuan. Perlakuan A dan B adalah inkubasi 30 dan 60 menit pada suhu kamar, sedangkan perlakuan C adalah inkubasi semalam pada suhu 4°C. Hasil pemurnian menunjukkan bahwa aktivitas spesifik dan tingkat kemurnian MAb secara berurutan adalah 358.45 U/mg, 237.83 U/mg untuk perlakuan C dan B, dan 229.67 U/mg untukperlakuan A. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa 'homemade' mini kolom yang dikembangkan dalam penelitian ini dapat digunakan untuk memurnikan MAb untuk kebutuhan riset skala laboratorium.Penelitian ini bertujuan mengembangkan pemurnian antibodi monoklonalmenggunakan eks-mini kolom yang isinya diganti dengan partikel gelassilikayang terkonjugasi dengan Protein A. Matriks Protein A yang digunakan adalahProsep vA, sedangkan antibodi target adalah antibodi monoklonal (MAb)terhadap antigen permukaan virus hepatitis B yang diisolasi dari asites mencitBalb/c. Sebelum pemurnian, sampel asites dibagi menjadi 3 yang masingmasingdiinkubasikandenganProteinAdalam3perlakuan.PerlakuanAdanBadalahinkubasi30dan60menitpadasuhukamar,sedangkanperlakuanCadalahinkubasisemalampadasuhu4°C.HasilpemurnianmenunjukkanbahwaaktivitasspesifikdantingkatkemurnianMAbsecaraberurutanadalah358.45U/mg,237.83 U/mg untuk perlakuan C dan B, dan 229.67 U/mg untukperlakuan A. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa 'homemade' mini kolomyang dikembangkan dalam penelitian ini dapat digunakan untuk memurnikanMAb untuk kebutuhan riset skala laboratorium.
References
Berruex LG, FreitagR, TennikovTB2000. Comparison of antibody binding to immobilized group specific affinity ligands in high performance monolith affinity chromatography. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 24: 95–104.
Bradford MM1976. A rapid and sensitive method for thequantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal.Biochem72:248-254.
Depamede SN, andRosyidi A2009. Suppression of Balb/c Lymphocyte by Bali Cattle Testis Extracts: The Role of TGF-B.Media Peternakan32(2):95-103.
Esser K-H, MarxWH, andLisowsky,T2005. Nucleic acid-free matrix: Regeneration of DNA binding columns. BioTechniques 39 (2): 270-271.
Graille M, SturaEA, CorperAL, SuttonBJ, TaussigMJ, Charbonnier J-B, andSilvermanGJ 2000. Crystal structure of a Staphylococcus aureus protein A domain complexed with the Fab fragment of a human IgM antibody: Structural basis for recognition of B-cell receptors and superantigen activity. PNAS 97 (10): 5399–5404.
Khan M, DongJJ, AcharyaSK, Dhagwahdorj Y, Abbas Z, Jafri SMW, MulyonoDH, TozunN, SarinSK 2004. Hepatology issues in Asia: Perspectives from regional leaders. J Gastroenterol Hepatol 19:S419–
S430.
Lee WM 1997. Hepatitis B virus infection. N. Engl. J. Med. 337 (24): 1733–1745.
Liu HF, WinterJMC, andBayerR2010. Recovery and purification process development for monoclonal antibody production. MAbs. 2(5): 480–499
McMahon BJ 2005. Epidemiology and natural history of hepatitis B. Semin Liver Dis. 25 Suppl 1: 3-8.
Mondal K, andGuptaMN2006. The affinity concept in bioseparation: Evolving paradigms and expanding range of applications. Biomolecular Engineering 23: 59–76.
Mulyanto, Depamede SN, Wahyono A, Jirintai, Nagashima S, Takahashi M, and Okamoto H 2011.
Analysis of the Full-Length Genomes of Novel Hepatitis B Virus Sebgenotypes C11 and C12 in Papua, Indonesia. J. Med. Virol. 83: 54-64.
Xiao-lan L, Lian-xiangD, Fu-pingL, Xi-qunZ, JiongX 2005. Purification and characterization of a novel fibrinolytic enzyme fromRhizopus chinensis12. Appl. Microbiol. Biotechnol. 67: 209-214.
